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rProtein A Crystarose 4FF（Affinity Chromatography Resin）

classification：Antibody purification packing

使用范围广，可以用来纯化大多数多克隆抗体，也可以单克隆抗体。

　　一、说明：

　　使用范围广，可以用来纯化大多数多克隆抗体，也可以单克隆抗体。

　　二、参数：

　　三、操作方法：

　　1、溶液配制：

　　Buffer A: 10mM 磷酸盐缓冲溶液+140 mM NaCl,PH7--7.4

　　Buffer B: 5mM柠檬酸+150mM 氯化钠

　　定溶至1升去离子水中，搅拌溶解，0.45um滤膜过滤备用。

　　2、吸附和洗涤缓冲液

　　用Buffer A平衡层析柱，调节样品的溶液的PH值和BufferA相同后低流速进样。进样完后，直接用Buffer B溶液洗脱，洗脱前在试管中预先加入一定量的Na2HPO或者1M Tris用来中和洗脱液的PH值。

　　3、再生或CIP

　　用去离子水冲洗柱子5-10个体积，再用0.1-0.5M浓度氢氧化钠清洗柱子3-5个柱体积，清洗完毕后用去离子水冲洗柱子知道PH值中性，用20%保存柱子。

　　四、应用举例

　　A 实验名称：从小鼠腹水中分离纯化IgG2a

　　1、 rProtein A FF凝胶装柱，柱床体积为5ml;

　　2、用Buffer A平衡5-10个床体积，流速为5ml/min(直径2.6cm层析柱，高5cm);

　　3、将50--100ml兔血清用0.45um滤膜过滤，上样。流速为3ml/min;

　　4、用Buffer A冲洗5-10 个床体积，流速为5ml/min;

　　5、在洗脱试管中加入12%洗脱体积的0.2M Na2HPO4溶液。

　　6、用约3个体积的Buffer B洗脱，用洗脱试管收集。

　　7、用纯水流洗柱子10个柱床体积，再用20%的乙醇流洗10 个柱床体积，流速为5ml/min

　　8、柱子置于+4~8℃环境中保存。

Key words：