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rProtein A Crystarose 4HP（Affinity Chromatography Resin）

classification：Antibody purification packing

类似rProtein A Sepharose 4HP,用于纯化单克隆抗体或多克隆抗体，高载量以及高分辨率。

　　一、说明：

　　类似rProtein A Sepharose 4HP,用于纯化单克隆抗体或多克隆抗体，高载量以及高分辨率。

　　二、参数：

　　三、操作方法：

　　1、溶液配制：

　　Buffer A: 10mM 磷酸盐缓冲溶液+140 mM NaCl,PH7--7.4

　　Buffer B: 5mM柠檬酸+150mM 氯化钠

　　定溶至1升去离子水中，搅拌溶解，0.45um滤膜过滤备用。

　　2、吸附和洗涤缓冲液

　　用Buffer A平衡层析柱，调节样品的溶液的PH值和BufferA相同后低流速进样。进样完后，直接用Buffer B溶液洗脱，洗脱前在试管中预先加入一定量的Na2HPO或者1M Tris用来中和洗脱液的PH值。

　　如果洗脱下的抗体有些杂带，可加吐温-20至终浓度0.05%

　　四、应用举例

　　A 实验名称：从小鼠腹水中分离纯化IgG2a

　　1、重组蛋白G 琼脂糖凝胶装柱，柱床体积为1ml,流尽20%乙醇溶液;

　　2、用Buffer A平衡5-10个床体积，流速为5ml/min(直径2.6cm层析柱，高5cm);

　　3、将50--100ml兔血清用0.45um滤膜过滤，上样。流速为3ml/min;

　　4、用Buffer A冲洗5-10 个床体积，流速为5ml/min;

　　5、在洗脱试管中加入12%洗脱体积的0.2M Na2HPO4溶液。

　　6、用约3个体积的Buffer B洗脱，用洗脱试管收集。

　　7、用纯水流洗柱子10个柱床体积，再用20%的乙醇流洗10 个柱床体积，流速为5ml/min

　　8、柱子置于+4~8℃环境中保存。

　　适用范围

　　Protein A和Protein G的相对结合强度

　　++++ =强结合，++ =中等结合，- =弱或不结

Key words：